Hej tamo! Kao dobavljač kataloških peptida, bavio sam se brojnim klijentima suočeni s izazovima povezanim s topljivošću peptida. To je uobičajena glavobolja, ali ne brinite, tu sam da podijelim nekoliko savjeta kako optimizirati topljivost kataloških peptida.
Prvo, shvatimo zašto je topljivost bitna. Peptidi se koriste u širokom rasponu primjena, od istraživanja do terapijskog razvoja. Ako se peptid ne otopi pravilno, može pobuditi vaše eksperimente ili tretmane. Na primjer, u studijama stanične kulture, slabo topljivi peptidi možda neće učinkovito dostići ciljne stanice, što dovodi do netočnih rezultata.
Čimbenici koji utječu na topljivost peptida
Prije nego što zaronimo u rješenja, pogledajmo čimbenike koji utječu na topljivost peptida. Jedan od glavnih čimbenika je sastav aminokiselina. Peptidi bogati hidrofobnim aminokiselinama poput leucina, izoleucina i valina imaju tendenciju manje topljivih u vodi. S druge strane, peptidi s visokim sadržajem hidrofilnih aminokiselina poput lizina, arginina i glutaminske kiseline su topljiviji.
Drugi faktor je duljina peptida. Općenito, duži peptidi su manje topljivi od kraćih. To je zato što duži peptidi imaju više hidrofobnih regija i veća je vjerojatnost da će formirati agregate.
PH otopine također igra ključnu ulogu. Peptidi imaju izoelektričnu točku (PI), što je pH na kojem imaju neto naboj od nule. Na PI su peptidi najmanje topljivi i skloni su tanoj. Dakle, podešavanje pH od PI može poboljšati topljivost.
Strategije za optimizaciju topljivosti peptida
1. Odaberite pravo otapalo
Voda je često prvi izbor za otapanje peptida, ali možda neće raditi za sve peptide. Za hidrofobne peptide mogu se koristiti organska otapala poput dimetil sulfoksida (DMSO) ili acetonitrila. Međutim, budite oprezni kada koristite organska otapala, jer mogu biti toksične za stanice i mogu utjecati na aktivnost peptida. Dobro je započeti s malom količinom organskog otapala, a zatim ga razrijediti vodom.
Na primjer, ako radite s hidrofobnim peptidom poputTvar p (9-11), možda ćete ga pokušati prvo otopiti u malom volumenu DMSO -a, a zatim ga razrijediti vodom do željene koncentracije.
2. Podesite pH
Kao što je ranije spomenuto, prilagođavanje pH može značajno poboljšati topljivost peptida. Možete koristiti međuspremnike za kontrolu pH. Za kisele peptide koristite osnovni pufer poput natrijevog hidroksida (NaOH) za povećanje pH. Za osnovne peptide, za smanjenje pH koristite kiseli pufer poput klorovodične kiseline (HCl).
Pri podešavanju pH važno je to učiniti postupno i nadzirati topljivost. Možete koristiti PH metar kako biste osigurali da je pH unutar željenog raspona.
3. Koristite deterdženti
Deterdženti mogu pomoći solubiliziranju hidrofobnih peptida smanjenjem površinske napetosti i sprečavanjem agregacije peptida. Uobičajeni deterdženti koji se koriste za solubilizaciju peptida uključuju Tween 20, Triton X-100 i SDS. Međutim, budite svjesni da deterdženti također mogu utjecati na aktivnost peptida i mogu ometati neke testove. Dakle, upotrijebite ih s oprezom i optimizirajte koncentraciju.
4. Sondikacija
Unificiranje je tehnika koja koristi visokofrekventne zvučne valove za razbijanje peptidnih agregata i poboljšanje topljivosti. Možete koristiti sonicator za soniranje otopine peptida u kratkom vremenskom razdoblju. Međutim, budite oprezni da se ne pretjeruje, jer to može oštetiti peptid.
5. Dodajte kaoteropne agense
Katropni agensi poput urea i gvanidin hidroklorid mogu poremetiti nekovalentne interakcije između molekula peptida i poboljšati topljivost. Djeluju denaturiranjem strukture peptida i sprečavanjem agregacije. Međutim, poput deterdženata, haotropni agensi također mogu utjecati na aktivnost peptida, pa ih koristite samo kad je to potrebno.
Studije slučaja
Pogledajmo neke primjere iz stvarnog svijeta optimizacije topljivosti peptida.
Slučaj 1:Matrix protein M1 (58-66) (virus gripe A)
Klijent je imao problema s otapanjem ovog peptida u vodi. Peptid je bio bogat hidrofobnim aminokiselinama, pa smo preporučili početak s malim volumenom DMSO -a. Također smo prilagodili pH na 8,0 pomoću Tris međuspremnika. Nakon što je 5 minuta uspravio, peptid se potpuno otopio.
Slučaj 2:Analitičar A (1-9)
Ovaj peptid bio je relativno topiv u vodi, ali klijent je želio povećati topljivost za određeni eksperiment. Predložili smo dodavanje male količine Tween 20 (0,1%) u otopinu. To je pomoglo u sprječavanju agregacije peptida i poboljšalo topljivost.
Zaključak
Optimiziranje topljivosti kataloških peptida ključno je za njihovu uspješnu upotrebu u različitim aplikacijama. Razumijevanjem čimbenika koji utječu na topljivost i korištenjem pravih strategija, možete osigurati da se vaši peptidi pravilno otapaju i rade kako se očekuje.
Ako još uvijek imate problema s topljivošću peptida ili imate bilo koja druga pitanja o našim kataloškim peptidima, ne ustručavajte se pružiti ruku. Tu smo da vam pomognemo da pronađete najbolja rješenja za vaše istraživačke ili razvojne potrebe. Bez obzira jeste li istraživač u laboratoriju ili programeru koji radi na novoj terapiji, možemo vam pružiti visokokvalitetne peptide i stručne savjete. Dakle, započnimo razgovor i vidimo kako možemo zajedno raditi na postizanju vaših ciljeva.
Reference
- Goodman, M. i sur. (2003). "Biosinteza peptida i proteina." U sveobuhvatnom kemiji prirodnih proizvoda, god. 2, str. 1-37.
- Wade, JD, & Tregear, GW (1993). "Sinteza peptida i dizajn." U metodama u enzimologiji, vol. 221, str. 1-61.
- Fields, GB, & Noble, RL (1990). "Sinteza peptida u čvrstoj fazi koristeći 9-fluorenilmetoksikarbonilne aminokiseline." International Journal of Peptide and Proteins Research, 35 (3), 161-214.