U području biološkog istraživanja, stanična linija Tet - 213 pojavila se kao značajan model za razne eksperimentalne ispitivanja, posebno u studijama vezanim za neuroznanost i onkologiju. Kao vodeći dobavljač TET -213 stanica, razumijemo važnost odabira odgovarajućih transfekcijskih reagensa za učinkovito isporuku gena u ove stanice. Ovaj post na blogu ima za cilj istražiti transfekcijske reagense koji su prikladni za TET - 213 i pružiti uvid u njihove prednosti i ograničenja.
Razumijevanje TET - 213 stanice
TET - 213 je stanična linija ljudskog neurona koja se obično koristi u istraživanju zbog njegove sposobnosti da se razlikova u stanice poput neurona. Te stanice su izvedene iz tumora neuroblastoma i zadržavaju mnoge karakteristike stanica neuronskih progenitora. Njihova jedinstvena svojstva čine ih vrijednim za proučavanje razvoja neurona, funkcije i patogeneze neuroloških bolesti. Transfektiranje egzogenih gena u TET - 213 stanice mogu pomoći istraživačima da razumiju funkciju gena, regulatorne mehanizme i učinke specifičnih proteina na stanične procese.
Ključna razmatranja transfekcije u TET - 213 stanicama
Prije odabira reagensa za transfekciju, potrebno je razmotriti nekoliko čimbenika. Prvo, učinkovitost transfekcije je presudna. Transfekcija visoke učinkovitosti osigurava da veliki udio stanica zauzima egzogenu DNK ili RNA, omogućujući snažnu ekspresiju ciljnog gena. Drugo, održivost stanica mora se održavati nakon transfekcije. Neki transfekcijski reagensi mogu biti toksični za stanice, što dovodi do stanične smrti ili nenormalnog staničnog ponašanja. Treće, vrsta nukleinske kiseline koja se transficira (DNA, RNA ili oligonukleotida) i njegova veličina također može utjecati na izbor reagensa transfekcije.
Transfekcijski reagensi pogodni za TET - 213 stanice
Transfekcijski reagensi na temelju lipida
Transfekcijski reagensi na temelju lipida jedna su od najčešće korištenih vrsta sredstava za transfekciju. Djeluju tako što formiraju liposome koji kapsuliraju nukleinsku kiselinu i spajaju staničnu membranu, omogućujući nukleinskoj kiselini da uđe u stanicu. Lipofektamin 2000 je dobro poznat transfekcijski reagens koji se temelji na lipidu koji se široko koristi za transfekciju TET - 213 stanica. Nudi visoku učinkovitost transfekcije, relativno nisku toksičnost i pogodna je za transfekciju i DNK i RNA.
Mehanizam lipofektamina 2000 uključuje stvaranje pozitivno nabijenih liposoma koji djeluju s negativno nabijenom nukleinskom kiselinom kako bi nastali lipopleksi. Ove lipoplekse tada se stanice internaliziraju endocitozom. Jednom u stanici, nukleinska kiselina se oslobađa i može se transportirati u jezgru radi ekspresije gena.
Drugi reagens koji se temelji na lipidu, Lipofectamin 3000, također je pokazao dobre performanse u transfekciji TET - 213 stanica. To je poboljšana verzija Lipofectamin 2000, s poboljšanom učinkovitošću transfekcije i smanjenom toksičnošću. Lipofectamin 3000 koristi novu formulaciju koja omogućava bolju interakciju sa staničnom membranom i učinkovitiju isporuku nukleinskih kiselina.
Transfekcijski reagensi na temelju polimera
Transfekcijski reagensi na bazi polimera druga su opcija za transfekciju TET - 213 stanica. Polietilenimin (PEI) je najčešće korišteni reagens na bazi polimera. PEI je kationski polimer koji može kondenzirati nukleinske kiseline u male čestice i promicati njihov unos od strane stanica. Zabilježeno je da postiže visoku učinkovitost transfekcije u TET - 213 stanicama, posebno za transfekciju DNK. Prednost PEI je njegova niska troškova i jednostavnost upotrebe. Međutim, može biti toksično za stanice u visokim koncentracijama, pa je potrebna pažljiva optimizacija uvjeta transfekcije.
Jetpei je komercijalni transfekcijski reagens utemeljen na polimeru koji je dizajniran tako da minimizira toksičnost uz održavanje visoke učinkovitosti transfekcije. Uspješno se koristi u transfekciji TET - 213 stanica, pružajući dobru ravnotežu između učinkovitosti transfekcije i vitalnosti stanica.
Vektori transfekcije utemeljenih na virusu
Vektori na bazi virusa također se široko koriste za isporuku gena u TET - 213 stanice. Adenovirusni vektori poznati su po visokoj učinkovitosti transfekcije i sposobnosti zaraze i podjele i ne -dijeljenih stanica. Oni mogu nositi relativno velike količine egzogene DNK i pružiti snažnu i trajnu ekspresiju gena. Međutim, proizvodnja adenovirusnih vektora je složenija i vremena - troši se u usporedbi s ne -virusnim transfekcijskim reagensima.
Lentivirusni vektori su druga opcija. Oni mogu integrirati egzogenu DNK u stanični genom domaćina, što rezultira stabilnom ekspresijom gena. Vektori lentivirusa prikladni su za dugoročne studije u TET - 213 stanicama, poput generiranja stabilnih staničnih linija. Međutim, oni također zahtijevaju posebno rukovanje zbog svojih potencijalnih rizika biološkog prometa.
Usporedba transfekcijskih reagensa za TET - 213 stanice
U usporedbi različitih transfekcijskih reagensa, važno je razmotriti njihovu izvedbu u smislu učinkovitosti transfekcije, vitalnosti stanica, lakoće upotrebe i troškova. Reagensi na bazi lipida poput Lipofectamin 2000 i 3000 relativno su jednostavni za upotrebu i imaju visoku učinkovitost transfekcije s prihvatljivom vitalnošću stanica. Prikladni su i za kratkoročne i dugoročne eksperimente. Polimerni reagensi poput PEI i JetPEI troškovi su - učinkoviti i mogu postići dobru učinkovitost transfekcije, ali potrebna je optimizacija toksičnosti. Vektori utemeljeni na virusima nude isporuku gena visoke učinkovitosti i stabilnu ekspresiju, ali zahtijevaju više specijalizirane opreme i sigurnosnih mjera opreza.
Primjene transficiranih TET - 213 stanica
Jednom uspješno transficirane, TET - 213 stanice mogu se koristiti u raznim primjenama. Na primjer, u studijama funkcija gena, transficirane stanice mogu se koristiti za istraživanje uloge specifičnih gena u razvoju i funkciji neurona. Prekomjerno eksprimirajući ili srušivši određeni gen, istraživači mogu promatrati promjene u staničnoj morfologiji, otpuštanju neurotransmitera i putovima transdukcije signala.
U otkrivanju lijekova transficirane TET - 213 stanice mogu se koristiti kao model probira za identificiranje potencijalnih terapijskih sredstava. Na primjer, geni povezani s neurološkim bolestima mogu se transficirati u stanice, a zatim se stanice mogu liječiti različitim spojevima kako bi se procijenile njihove učinke na fenotipe povezane s bolešću.
Nadalje, TET - 213 stanice transficirane genima koji kodiraju fluorescentne proteine mogu se koristiti za studije živih staničnih slika. To omogućava istraživačima da promatraju dinamičke stanične procese u stvarnom vremenu.
Srodni peptidi za povezane eksperimente
U nekim eksperimentima koji uključuju transficirane TET - 213 stanice mogu se koristiti dodatni peptidi. Na primjer,Ciklo (RADFK),,Tvar p (9 - 11), iBeta - amiloid (1 - 40), čovjekMože se koristiti u studijama vezanim za neuronsku signalizaciju, interakcije receptora peptida i neurodegenerativne bolesti. Ovi peptidi mogu pomoći u daljnjem rasvjetljavanju mehanizama na kojima se temelji neuronska funkcija i razvoj bolesti.
Zaključak
Odabir odgovarajućeg reagensa za transfekciju za TET - 213 stanice presudan je za uspješno isporuku gena i naknadne eksperimentalne studije. Transfekcijski reagensi na temelju lipida, na bazi polimera i virusa imaju svoje prednosti i ograničenja. Istraživači bi trebali pažljivo razmotriti specifične zahtjeve svojih eksperimenata, kao što su učinkovitost transfekcije, vitalnost stanica i vrsta nukleinske kiseline koja se transficira, pri odabiru reagensa za transfekciju.
Kao dobavljač TET - 213 stanica, zalažemo se za pružanje stanica visoke kvalitete i pružanje smjernica o najboljim praksama za staničnu kulturu i transfekciju. Ako ste zainteresirani za kupnju TET - 213 ćelija za vaše istraživanje ili imate pitanja o transfekcijskim reagensima i povezanim eksperimentima, slobodno nas kontaktirajte za daljnje informacije i razgovarajte o potencijalnim mogućnostima suradnje.
Reference
- Sambrook, J., i Russell, DW (2001). Molekularno kloniranje: laboratorijski priručnik. Laboratorij za hladnu proljetnu luku.
- Chen, C., i Okayama, H. (1987). Transformacija visoke učinkovitosti stanica sisavaca plazmidom DNA. Molekularna i stanična biologija, 7 (8), 2745 - 2752.
- Amara, F., Rehem, A., & Galy, A. (2016). Pregled trenutnih metoda transfekcije i sustava isporuke. Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, 8 (3), 181 - 187.