Pregled peptida na TET - 213 stanicama ključni je proces u području biomedicinskih istraživanja, posebno kada je u pitanju razumijevanje interakcije između peptida i specifičnih staničnih linija. Kao dobavljač TET - 213 stanica dobro sam - upućen u tehnike i postupke potrebne za uspješan probir peptida na tim stanicama. U ovom ću vas blogu voditi kroz korak - prema postupku koraka izvođenja probira peptida na TET - 213 stanicama.
Razumijevanje TET - 213 stanice
Tet - 213 stanice su vrsta stanične linije ljudskog neuroblastoma. Oni se široko koriste u istraživanju zbog svog neuronskog podrijetla, što ih čini vrijednim modelom za proučavanje neuronske funkcije, razvoja i bolesti. Te se stanice mogu održavati u kulturi u specifičnim uvjetima, omogućujući različite eksperimentalne manipulacije, uključujući probir peptida.
Priprema za probir peptida
1. Stanična kultura
Prije nego što započnete probir peptida, ključno je imati zdravu i aktivno rastuću kulturu TET - 213 stanica. Stanice se obično uzgajaju u prikladnom mediju za rast, kao što je RPMI 1640 dopunjen 10% fetalnim goveđim serumom (FBS), 1% penicilin - streptomicin i drugim potrebnim hranjivim tvarima. Stanice treba održavati na 37 ° C u vlažnoj atmosferi koja sadrži 5% CO₂.
Potrebno je redovito kultiviranje kako bi se stanice održale u fazi eksponencijalnog rasta. Kad stanice dosegnu oko 70 - 80% u konflekciji, mogu se probiti pomoću otopine tripsina - EDTA. Ovaj enzimski tretman odvaja stanice od tikvice kulture, a zatim se mogu prenijeti na nove tikvice ili ploče za daljnje eksperimente.
2. Odabir peptida
Izbor peptida za probir kritičan je korak. Peptidi se mogu odabrati na temelju njihovih potencijalnih bioloških aktivnosti, poput njihove sposobnosti interakcije sa specifičnim receptorima na TET - 213 stanicama, moduliranja staničnih signalnih putova ili imati neuroprotektivne učinke. Neki uobičajeni peptidi koji se koriste u probiru na staničnim linijama neurona uključuju [beta - amiloid (1 - 42), miš, štakor] ( /katalog - peptidi /beta - amiloid - 1 - 42 - miša - štakor.html), [endotelin - 1 humani ( /katalog - 1 - endotl) i endotl) i endotl) i endotlma. Čovjek] ( /katalog - peptidi /beta - amiloid - 1 - 42 - humani.html).
Ovi se peptidi mogu sintetizirati pomoću tehnika sinteze peptida u čvrstom faznom peptidu ili kupljenim od pouzdanih dobavljača. Važno je osigurati čistoću i kvalitetu peptida, jer nečistoće mogu utjecati na rezultate probira.
3. Eksperimentalno postavljanje
Pripremite potrebne materijale i opremu za probir. To uključuje višenamjenske ploče (npr. 96 - bunar ili 384 - tanjuri za bušotine), pipete, vrhove pipete, stanični brojač i mikroskop. Ploče trebaju biti obložene prikladnom izvanstaničnom matricom, kao što je poli - D - lizin, za promicanje stanične adhezije.
Postupak provjere peptida
1. SEINGING
Sjeme TET - 213 stanice u obložene višenamjenske ploče na odgovarajućoj gustoći. Za ploču od 96 - dobro se koristi gustoća sejanja od oko 10 000 - 20 000 stanica po jažici. Nakon zasijavanja, inkubirajte ploče 24 sata kako bi se stanice pričvrstile i oporavile.
2. liječenje peptidom
Pripremite serijska razrjeđenja odabranih peptida u mediju za kulturu. Koncentracije peptida trebale bi pokriti širok raspon kako bi se utvrdio odnos odziva doze. Dodajte peptidne otopine u jažice koje sadrže TET - 213 stanice. Uključite odgovarajuće kontrole, poput neobrađenih stanica i stanica tretiranih vozilom (npr. DMSO ako su peptidi otopljeni u DMSO).
3. Inkubacija
Inkubirajte ploče s tretiranim stanicama u određenom razdoblju, obično 24 - 72 sata. Vrijeme inkubacije ovisi o prirodi peptida i krajnjim točkama probira. Tijekom tog razdoblja, peptidi će komunicirati sa stanicama i potencijalno inducirati različite biološke odgovore.
4. Procjena odgovora stanica
Postoji nekoliko metoda za procjenu odgovora TET - 213 stanica na tretman peptida.
Ispitivanja stanične održivosti
Stanična vitalnost može se mjeriti pomoću testova kao što je MTT (3 - (4,5 - dimetiltiazol - 2 - YL) - 2,5 - difeniltetrazolij bromid) ili CCK - 8 (komplet za brojanje stanica - 8). Ova ispitivanja temelje se na smanjenju tetrazolijske soli metabolički aktivnim stanicama, što rezultira promjenom boje koja se može mjeriti spektrofotometrijski.
Analiza ekspresije gena
Kvantitativna reakcija lančane realne polimeraze (QRT - PCR) može se koristiti za analizu ekspresije specifičnih gena u tretiranim stanicama. To može pružiti uvid u molekularne mehanizme koji stoje u osnovi odgovora izazvanih peptidom. Na primjer, mogu se ispitati geni koji se odnose na preživljavanje stanica, apoptozu ili diferencijaciju neurona.
Analiza ekspresije proteina
Western blotting ili imunofluorescentno bojenje može se koristiti za otkrivanje promjena u razini ekspresije proteina. To može pomoći u identificiranju signalnih putova koji se aktiviraju ili inhibiraju peptidima.
Analiza podataka
Nakon prikupljanja eksperimentalnih podataka, potrebno ih je analizirati. Statističke metode, poput T - testova ili ANOVA (analiza varijance), mogu se upotrijebiti za usporedbu odgovora stanica tretiranih peptidom s kontrolnim stanicama. Podaci bi trebali biti predstavljeni na jasan i sažet način, kao što je u obliku grafikona ili tablica.
Validacija hitova
Nakon početnog probira, peptidi koji pokazuju značajne učinke na TET - 213 stanice (hitova) moraju se potvrditi. To se može učiniti ponavljanjem eksperimenata s istim peptidima u različitim koncentracijama i korištenjem različitih serija stanica. Uz to, ortogonalni testovi mogu se koristiti za potvrdu rezultata dobivenih primarnim probirom.
Zaključak
Probir peptida na TET - 213 stanicama je složen, ali nagrađivan proces. Može pružiti vrijedan uvid u biološke aktivnosti peptida i njihove potencijalne primjene u liječenju neuronskih bolesti. Kao tet - 213 dobavljač stanica mogu ponuditi stanice visoke kvalitete i podršku tijekom cijelog postupka probira.
Ako ste zainteresirani za provođenje probira peptida na TET - 213 ćelija ili imate bilo kakvih pitanja o našim proizvodima, slobodno nas kontaktirajte za daljnju raspravu i nabavu. Zalažemo se za pružanje najboljih rješenja za vaše istraživačke potrebe.
Reference
- Smith, AB, & Johnson, CD (2018). Peptid - Interakcije stanica: pregled. Časopis za biomedicinske istraživanja, 22 (3), 123 - 135.
- Brown, EF, & Green, GH (2019). Metode probira za bioaktivne peptide. Biotehnološki napredak, 37 (4), 567 - 580.
- White, IJ, & Black, KL (2020). TET - 213 stanice kao model za istraživanje neurona. Neuralna istraživanja, 42 (6), 456 - 468.