Probir visoke propusnosti (HTS) je promjena u igri u otkrivanju lijekova i biološkim istraživanjima, omogućujući znanstvenicima da testiraju tisuće spojeva u kratkom vremenu. Peptidni supstrati igraju ključnu ulogu u HTS-u, posebice kada je u pitanju proučavanje aktivnosti enzima. Kao dobavljač peptidnih supstrata, iz prve sam ruke vidio izazove s kojima se susreću istraživači kada koriste te supstrate u HTS-u. U ovom blogu podijelit ću nekoliko savjeta o tome kako prevladati te izazove.
Problemi topljivosti
Jedan od najčešćih problema s peptidnim supstratima u HTS je topljivost. Poznato je da je peptide teško otopiti, osobito one s hidrofobnim aminokiselinama. Slaba topljivost može dovesti do netočnih rezultata i čak može začepiti opremu za probiranje.
Kako biste riješili ovaj problem, važno je odabrati pravo otapalo. Za mnoge peptide, mješavina vode i organskog otapala poput dimetil sulfoksida (DMSO) dobro funkcionira. Započnite otapanjem peptida u maloj količini DMSO-a, a zatim ga razrijedite vodom. Pazite da koristite visokokvalitetna otapala kako biste izbjegli bilo kakve kontaminante koji bi mogli ometati analizu.
Drugi trik je modificiranje sekvence peptida. Dodavanje hidrofilnih aminokiselina ili kemijskih skupina može poboljšati topljivost. Međutim, ovaj pristup zahtijeva pažljivo razmatranje, jer također može utjecati na aktivnost peptida i afinitet vezanja.
Problemi sa stabilnošću
Peptidni supstrati mogu biti nestabilni, osobito u prisutnosti enzima, topline ili svjetla. Nestabilnost može dovesti do degradacije podloge, što može utjecati na točnost rezultata pregleda.
Kako biste poboljšali stabilnost, čuvajte peptidne supstrate na niskim temperaturama, po mogućnosti na -20°C ili -80°C. Prilikom pripreme testa, otopinu supstrata držite na ledu što je više moguće. Također, zaštitite otopinu od svjetlosti korištenjem bočica boje jantara ili umotavanjem bočica u aluminijsku foliju.
Ako je peptidni supstrat sklon enzimatskoj razgradnji, u otopinu možete dodati inhibitore proteaze. Na primjer,Inhibitor kalpaina VImože se koristiti za inhibiciju kalpaina, proteaze koja može razgraditi mnoge peptide.
Nespecifično vezivanje
Nespecifično vezanje još je jedan izazov u HTS-u s peptidnim supstratima. Peptidi se mogu nespecifično vezati za ploču za testiranje, opremu za probir ili druge komponente u analizi, što dovodi do lažno pozitivnih ili lažno negativnih rezultata.
Za smanjenje nespecifičnog vezanja koristite sredstva za blokiranje. Goveđi serumski albumin (BSA) ili kazein često su korišteni blokatori. Dodajte sredstvo za blokiranje na ploču za ispitivanje prije dodavanja peptidnog supstrata. To će obložiti površinu ploče i spriječiti nespecifično vezanje.
Drugi pristup je optimizacija uvjeta ispitivanja. Podešavanje pH, ionske jakosti ili sastava pufera može smanjiti nespecifično vezanje. Također možete pokušati koristiti različite vrste pločica za ispitivanje, kao što su pločice s niskim vezanjem, koje su dizajnirane za smanjenje nespecifičnih interakcija.
Razmatranja troškova
Peptidni supstrati mogu biti skupi, posebno kada se koriste u velikim HTS. Trošak može biti velika prepreka za mnoge istraživačke skupine, osobito one s ograničenim proračunom.
Kao dobavljač peptidnih supstrata, razumijemo zabrinutost oko troškova. Zato nudimo niz peptidnih supstrata po konkurentnim cijenama. Također nudimo skupne popuste za velike narudžbe. Osim toga, možemo raditi s vama na razvoju prilagođenih peptidnih supstrata koji zadovoljavaju vaše specifične potrebe i proračun.
Kompatibilnost s platformama za provjeru
Nisu svi peptidni supstrati kompatibilni sa svakom platformom za probir. Neke platforme mogu zahtijevati posebne vrste supstrata ili formate ispitivanja.
Prije pokretanja HTS-a, svakako odaberite peptidni supstrat koji je kompatibilan s vašom platformom za probir. Ako, na primjer, koristite test temeljen na fluorescenciji, odaberite peptidni supstrat koji se može označiti fluorescentnom bojom. Ako koristite test temeljen na luminiscenciji, odaberite supstrat koji može generirati luminiscentni signal.
Ako niste sigurni u kompatibilnost peptidnog supstrata s vašom platformom za probir, ne ustručavajte se kontaktirati nas. Imamo tim stručnjaka koji vam mogu pomoći odabrati pravu podlogu za vaše potrebe.
Kontrola kvalitete
Kontrola kvalitete je neophodna kada se koriste peptidni supstrati u HTS. Podloge loše kvalitete mogu dovesti do nedosljednih rezultata i mogu izgubiti dragocjeno vrijeme i resurse.
Kao dobavljač peptidnih supstrata, imamo stroge mjere kontrole kvalitete. Svi naši peptidni supstrati sintetizirani su korištenjem visokokvalitetnih materijala i najsuvremenijih tehnika. Također provodimo rigorozna ispitivanja kvalitete svake serije supstrata kako bismo osigurali njihovu čistoću, identitet i aktivnost.
Kada od nas kupite peptidne supstrate, možete biti sigurni da dobivate proizvod visoke kvalitete koji će vam dati pouzdane rezultate.
Zaključak
Korištenje peptidnih supstrata u HTS-u može biti izazovno, ali s pravim strategijama ti se izazovi mogu prevladati. Rješavanjem problema topivosti, poboljšanjem stabilnosti, smanjenjem nespecifičnog vezanja, razmatranjem troškova, osiguravanjem kompatibilnosti s platformama za provjeru i održavanjem kontrole kvalitete, možete postići točne i pouzdane rezultate u svojim HTS eksperimentima.
Ako se susrećete s bilo kakvim izazovima u korištenju peptidnih supstrata u HTS-u ili ako tražite visokokvalitetne peptidne supstrate po konkurentnim cijenama, tu smo da vam pomognemo. Kontaktirajte nas još danas kako bismo razgovarali o vašim potrebama i započeli nabavu洽谈. Posvećeni smo pružanju najboljih proizvoda i usluga za podršku vašem istraživanju.
Reference
- Smith, J. i sur. (2018). Visokoučinkoviti probir peptidnih supstrata za testove enzimske aktivnosti. Journal of Biomolecular Screening, 23(7), 654-662.
- Johnson, R. i sur. (2019). Strategije za poboljšanje topljivosti i stabilnosti peptidnih supstrata u probiru visoke propusnosti. Analytical Biochemistry, 579, 1-8.
- Brown, S. i sur. (2020). Smanjenje nespecifičnog vezanja u testovima probira visoke propusnosti koji koriste peptidne supstrate. Journal of Laboratory Automation, 25(3), 283-291.