Hej, tamo, ljubitelji ćelija! Kao dobavljač TET - 213 ćelija imao sam svoj pravi udio iskustva u vezi s tim jedinstvenim ćelijama. U ovom ću blogu podijeliti nekoliko savjeta kako održati održivost TET - 213 stanica.
Prvo, shvatimo što su Tet - 213 stanice. Oni su vrsta stanične linije koja je pokazala veliki potencijal u raznim istraživačkim područjima, poput neuroznanosti i studija raka. Ali održavanje njihovih živih i udaraca nije uvijek šetnja parkom.
Medij za staničnu kulturu
Temelj održavanja bilo koje stanične linije pravi je medij za kulturu. Za TET - 213 stanice, medij visoke kvalitete je obavezan. Obično preporučujem korištenje medija koji je bogat esencijalnim hranjivim tvarima. RPMI 1640 Srednji, dopunjen 10% fetalnim goveđim serumom (FBS), penicilinom i streptomicinom, za mene je učinio čuda. FBS pruža faktore rasta i hormone koje ove stanice trebaju napredovati, dok antibiotici pomažu u sprječavanju onečišćenja.
Obavezno pravilno pohranite medij. Držite ga na 4 ° C i zaštitite od svjetla. Prije nego što ga koristite, zagrijte ga do 37 ° C u vodenoj kupelji. To oponaša tjelesnu temperaturu i ugodnije je za stanice.
Uvjeti inkubacije
Tet - 213 ćelije su prilično izbirljive u pogledu svog okruženja. Vole se inkubirati na 37 ° C u vlažnoj atmosferi s 5% CO₂. Ovo okruženje usko nalikuje fiziološkim stanjima u ljudskom tijelu.
Uložite u dobar inkubator. Trebao bi imati stabilnu temperaturu i kontrolu CO₂. Redovito provjeravajte postavke i kalibraciju inkubatora kako biste osigurali da je sve u redu. Također, redovito očistite inkubator kako biste spriječili izgradnju onečišćenja.
Subkulturacija
Subkulturiranje je važan korak u održavanju vitalnosti stanica. Kad TET - 213 stanice dosegnu oko 80 - 90%, vrijeme je da ih podijelite. Prvo uklonite stari medij i stanice operite fiziološkom otopinom puferiranom fosfatom (PBS) da biste se riješili bilo kakvih krhotina. Zatim dodajte otopinu tripsina - EDTA kako biste odbacili stanice od tikvice kulture. Inkubirajte tikvicu na 37 ° C nekoliko minuta dok stanice ne počnu zaokružiti i odvojiti se.
Nakon što se stanice odvoje, dodajte svježi medij kako biste neutralizirali tripsin. Centrifugirajte staničnu suspenziju malom brzinom da bi stanice peletile. Resuspendirajte pelet u svježem mediju i prebacite stanice u nove kulture na odgovarajućoj gustoći sjemenki. Gustoća sjemenki od oko 5 x 10⁴ stanica/cm² obično djeluje dobro za TET - 213 stanice.
Nadgledanje zdravlja stanica
Redovito praćenje zdravlja vaših TET - 213 stanica je presudno. Upotrijebite fazni - kontrastni mikroskop za provjeru stanične morfologije. Zdravi TET - 213 stanice trebaju imati ujednačen oblik i biti dobro pričvršćene na tikvicu. Ako primijetite bilo kakve znakove stanične smrti, poput plutajućih stanica ili nenormalnih oblika stanica, to bi mogao biti znak problema.
Također možete izvršiti test održivosti, poput Trypan Blue Isključenog ispitivanja. Pomiješajte malu količinu svoje stanične ovjesa s Trypan Blue. Žive stanice isključit će boju, dok će je mrtve stanice prihvatiti i izgledati plavo. Broji broj živih i mrtvih stanica pomoću hemocitometra za izračunavanje postotka održivosti stanice.
Kvaliteta reagensa
Korištenje reagensa s visokim kvalitetom nije pregovarački. Kvaliteta FBS -a, antibiotika i drugih aditiva može imati značajan utjecaj na vitalnost stanica. Kada odaberete FBS, potražite seriju koja je testirana zbog njegove sposobnosti da podržava rast stanica. Izbjegavajte korištenje isteka reagensa ili reagensa koji su se nepravilno čuvali.
Neki drugi čimbenici koje treba uzeti u obzir su peptidi koji se mogu koristiti zajedno s TET - 213 stanicama. Na primjer,Protein melanocita PMEL 17 (130 - 138) (čovjek)pokazao je potencijal u nekim istraživanjima vezanim za staničnu signalizaciju.Urechistachininin iiDynorphin A (1 - 17)su i peptidi koji se mogu istražiti u kontekstu TET - 213 istraživanja stanica.
Rješavanje problema
Ako imate problema s održavanjem održivosti svojih TET - 213 stanica, nemojte paničariti. Evo nekoliko uobičajenih problema i rješenja:
Zagađenje: Ako vidite znakove zagađenja bakterija ili gljivice, poput oblaka u srednjim ili vidljivim kolonijama, odmah odbacite kontaminirane kulture. Očistite inkubator i svu opremu temeljito. Obavezno slijedite stroge aseptičke tehnike prilikom rukovanja stanicama.
Loš rast stanica: Ako stanice ne rastu dobro, provjerite medij za kulturu. Moglo bi se dogoditi da je medij star ili dodaci ne rade ispravno. Također provjerite jesu li uvjeti inkubacije točni. Ponekad, mala promjena temperature ili koncentracije CO₂ može utjecati na rast stanica.
Stanični odred: Ako se stanice previše lako odvajaju, to bi moglo biti zbog prekomjerne tripsinizacije. Sljedeći put smanjite vrijeme inkubacije tripsina. Također, provjerite je li otopina tripsina - EDTA svježa.
Zaključno, održavanje održivosti TET - 213 stanica zahtijeva pažnju na detalje i dobro razumijevanje njihovih potreba. Slijedite ove savjete, možete održati svoje Tet - 213 stanice zdravim i produktivnim.
Ako ste na tržištu za visokokvalitetne Tet - 213 ćelije, volio bih razgovarati s vama. Bez obzira jeste li istraživač koji radi na malom projektu ili velikom biotehničkom kompanijom, mogu vam pružiti stanice koje su vam potrebne. Potaknite razgovor da biste započeli razgovor o svojim zahtjevima i kako možemo raditi zajedno.
Reference
- Freshney, RI (2016). Kultura životinjskih stanica: priručnik osnovne tehnike i specijalizirane primjene. Wiley.
- Doyle, A., i Griffiths, JB (2012). Kultura stanica i tkiva: Laboratorijski postupci. Wiley - Blackwell.