Peptid aktivni farmaceutski sastojci (API) privukli su značajnu pažnju u farmaceutskoj industriji zbog svoje visoke specifičnosti, male toksičnosti i potencijala za liječenje širokog raspona bolesti. Kao vodeći dobavljač peptidnih API -ja, posvećeni smo pružanju visokokvalitetnih peptidnih proizvoda naprednim metodama sinteze. U ovom ćemo se blogu sintetizirati na različite načine na koje se sintetiziraju peptidni API.
Sinteza peptida u čvrstoj - fazni peptid (SPPS)
Sinteza peptida u čvrstoj - fazni peptid jedna je od najčešće korištenih metoda za sintetiziranje peptidnih API -ja. Taj je pristup pokrenuo Robert Bruce Merrifield 1963. godine, koji je revolucionirao sintezu peptida i zaradio mu Nobelovu nagradu za kemiju 1984. godine.
Osnovni princip SPPS -a uključuje pričvršćivanje C -termina prve aminokiseline na netopljivu čvrstu potporu, poput smole. Ova smola pruža stabilnu platformu za naknadne kemijske reakcije. Amino skupina priložene aminokiseline zaštićena je prikladnom zaštitnom skupinom, obično FMOC (9 - fluorenilmetiloksikarbonil) ili BOC (TERT - butiloksikarbonil).
Jednom kada je prva aminokiselina pričvršćena na smolu, uklonjena je zaštitna skupina u svojoj amino grupi, izlažući reaktivnu amino skupinu. Sljedeća aminokiselina, također sa zaštićenom amino skupinom, zatim se povezuje sa slobodnom amino skupinom prethodno priložene aminokiseline pomoću reagensa za spajanje. Općenito korišteni reagensi za spajanje uključuju DIC (N, N ' - diisopropilcarbodiimid), hbtu (o - benzotriazol - n, n, n', n ' - tetrametil - uronium - hexafluoro - fosfat - 1 - (n - (7 -azabenzoria tetrametiluronij heksafluorofosfat).
Nakon svakog koraka spajanja, nereagirane amino skupine su ograničene kako bi se spriječilo stvaranje sekvenci brisanja. To se obično radi pomoću octenog anhidrida. Ciklus deprotekcije, spajanja i zatvaranja ponavlja se za svaku aminokiselinu u željenom peptidnom nizu.
Jednom kada se na smolu sastavi čitav slijed peptida, peptid se cijepa iz smole pomoću koktela cijepanja. Ovaj koktel također uklanja sve bočne zaštitne skupine lanca koje su bile prisutne na aminokiselinama tijekom sinteze. Cijepani peptid se zatim pročišćava metodama kao što je tekuća kromatografija visoke performanse (HPLC).
Otopina - sinteza faznog peptida
Rješenje - sinteza faznog peptida je starija metoda, ali još uvijek ima svoje prednosti u određenim situacijama. U ovoj se metodi sve reakcije odvijaju u otopini, a peptid nije pričvršćen na čvrstu potporu.
Sinteza započinje zaštitom amino i karboksilnih skupina pojedinih aminokiselina. Slično SPPS -u, zaštitne skupine poput FMOC ili BOC koriste se za amino skupinu, a ester grupe se koriste za zaštitu karboksilne skupine.
Prvi korak je spajanje dviju zaštićenih aminokiselina u obliku dipeptida. To se postiže pomoću reagensa za spajanje, slično onima koji se koriste u SPPS -u. Nakon formiranja dipeptida uklanjaju se zaštitne skupine na jednom kraju dipeptida, a zatim se povezuju s drugom zaštićenom aminokiselinom ili dipeptidom da tvore duži peptid.
Proces je ponovljen korak - korakom dok se ne dobije željeni peptidni slijed. Jedan od izazova sinteze otopine - faza je pročišćavanje intermedijarnih peptida na svakom koraku, jer reakcijska smjesa sadrži razne po - proizvodima i nereagiranim polaznim materijalima. Pročišćavanje se obično provodi ekstrakcijom, kristalizacijom ili kromatografijom.
Kemijska ligacija
Kemijska ligacija snažna je metoda za sintetiziranje velikih peptida ili proteina koje je teško sastaviti pomoću tradicionalnih SPPS -a ili sinteze faze otopine. Jedna od najpoznatijih metoda kemijske ligacije je izvorna kemijska ligacija (NCL).
U NCL -u, peptid s C -terminalnim tioesterom reagira s drugim peptidom s N -terminalnim ostatkom cisteina. Reakcija se javlja u blagim vodenim uvjetima i rezultira stvaranjem nativne peptidne veze između dva peptida.
Proces uključuje prvo sintetiziranje dva ili više peptidnih segmenata pomoću SPPS -a ili sinteze faze otopine. Jedan segment priprema se s C -terminalnim tioesterom, a drugi s N - terminalnim cisteinom. Ti se segmenti zatim miješaju u prikladnom puferu, a reakcija ligacije odvija se. Nakon ligacije, ako je potrebno, ostatak cisteina može se dalje izmijeniti ili koristiti kao ručica za dodatne kemijske reakcije.
Konvergentna sinteza
Konvergentna sinteza je strategija koja kombinira prednosti i SPPS -a i kemijske ligacije. Umjesto sintetiziranja cijelog peptidnog slijeda na linearni način, peptid je podijeljen u manje segmente, koji se sintetiziraju odvojeno koristeći SPPS.
Ti se segmenti zatim povezuju zajedno pomoću kemijskih metoda ligacije. Ovaj pristup smanjuje broj koraka spajanja potrebnih za sintezu velikih peptida, koji mogu poboljšati ukupni prinos i čistoću konačnog proizvoda. Na primjer, dugi peptid može se podijeliti u tri ili četiri segmenta, od kojih svaki sadrži 10 - 20 aminokiselina. Ti se segmenti sintetiziraju na smoli, cijepaju se, a zatim na konvergentni način ligiraju.
Primjeri naših peptidnih API -ja
Nudimo širok raspon peptidnih API -ja, uključujućiC20 - OTB - Glu (OBBU) - ATBI10 - ATBU) Fotografije - O Oie - Oana - OE,,C20 (OTBU) - Glu (OTBU), iPalmitoil - Glu (OSU) - OTBU. Ti se peptidi sintetiziraju pomoću gore opisanih naprednih metoda, osiguravajući visoku čistoću i kvalitetu.
Kontrola kvalitete u sintezi peptida API
Kontrola kvalitete od najveće je važnosti u sintezi peptidnih API -ja. Imamo sveobuhvatan sustav kontrole kvalitete kako bismo osigurali da naši proizvodi ispune najviše standarde.
Nakon sinteze, peptid se analizira različitim tehnikama, uključujući HPLC, masenu spektrometriju (MS) i nuklearnu magnetsku rezonancu (NMR). HPLC se koristi za određivanje čistoće peptida, dok se MS koristi za potvrdu molekularne mase peptida. NMR može pružiti informacije o strukturi i konformaciji peptida.
Također provodimo studije stabilnosti kako bismo osigurali da peptidni API -ji ostanu stabilni u različitim uvjetima skladištenja. To uključuje testiranje peptida na različitim temperaturama, pH vrijednosti i u prisutnosti različitih uzbuđenja.
Zaključak
Sinteza peptidnih API -ja je složen i višestruki korak koji zahtijeva napredne tehnike i strogu kontrolu kvalitete. Kao dobavljač peptidnih API -ja, neprestano istražujemo nove metode i tehnologije za poboljšanje učinkovitosti i kvalitete naše sinteze. Bilo da se radi o sintezi peptida u čvrstom faznom peptidu, sintezi otopine - faze, kemijskom ligaciji ili konvergentnoj sintezi, posvećeni smo pružanju našim kupcima visokokvalitetne peptidne proizvode.
Ako ste zainteresirani za kupnju naših peptidnih API -ja ili imate bilo kakvih pitanja o sintezi peptida, slobodno nas kontaktirajte za rasprave o nabavi. Radujemo se što ćemo raditi s vama kako bismo zadovoljili vaše potrebe za peptidom.
Reference
- Fields, GB, & Noble, RL (1990). Sinteza peptida u čvrstom - faznom peptidu koristeći 9 - fluorenilmetoksikarbonilne aminokiseline. Međunarodni časopis za istraživanje peptida i proteina, 35 (2), 161 - 214.
- Dawson, PE, Muir, TW, Clark - Lewis, I., & Kent, SBH (1994). Sinteza proteina izvornom kemijskom ligacijom. Science, 266 (5186), 776 - 779.
- Chan, WC, & White, PD (2000). FMOC sinteza peptida u čvrstoj fazi: praktični pristup. Oxford University Press.