Kako se kvantificiraju kataloški peptidi?
Bok tamo! Ja sam dobavljač kataloških peptida i danas želim razgovarati o tome kako ćemo kvantificirati ove malene. Peptidi su iznimno važni u čitavom nizu područja, od istraživanja do medicine, a dobivanje točne kvantifikacije je ključno.
Prvo, razgovarajmo o tome zašto uopće moramo kvantificirati kataloške peptide. Pa, kada istraživači ili ljudi u medicinskom polju koriste peptide, moraju znati s koliko točno rade. Bilo da se radi o laboratorijskom eksperimentu, kliničkom ispitivanju ili razvoju novog lijeka, precizne količine su važne. Ako koristite premalo, vaši rezultati možda neće biti točni, a ako koristite previše, mogli biste zabrljati cijelu stvar.
Dakle, kako ćemo to učiniti? Postoji nekoliko različitih metoda, a ja ću vam ih raščlaniti.
Jedan od najčešćih načina je UV - Vis spektroskopija. Ova metoda iskorištava činjenicu da peptidi apsorbiraju ultraljubičasto i vidljivo svjetlo na određenim valnim duljinama. Aminokiseline poput triptofana, tirozina i fenilalanina imaju određena svojstva apsorpcije. Kada osvijetlimo svjetlo određene valne duljine kroz otopinu našeg peptida, možemo izmjeriti koliko se tog svjetla apsorbira. Na temelju apsorpcijske vrijednosti i poznatog koeficijenta ekstinkcije peptida (koji je povezan s njegovim aminokiselinskim sastavom) možemo izračunati koncentraciju peptida u otopini. Na primjer, ako imamo peptid s visokim sadržajem triptofana, on će apsorbirati više svjetla na oko 280 nm. Koristimo jednostavnu formulu, temeljenu na Beer-Lambertovom zakonu, da bismo izračunali koncentraciju. To je relativno brza i jednostavna metoda, ali ima neka ograničenja. Kontaminanti u otopini peptida također mogu apsorbirati svjetlost na istim valnim duljinama, što može poremetiti naša mjerenja.
Druga popularna metoda je Bradfordov test. Ovo je kolorimetrijski test koji se oslanja na boju koja se zove Coomassie Brilliant Blue G - 250. Kada se ova boja veže za peptid, ona mijenja boju. Tada možemo izmjeriti apsorbanciju obojene otopine na određenoj valnoj duljini (obično oko 595 nm). Količina promjene boje proporcionalna je količini peptida u otopini. Izrađujemo standardnu krivulju koristeći poznate koncentracije referentnog peptida, a zatim uspoređujemo apsorbanciju našeg uzorka nepoznatog peptida s tom krivuljom kako bismo odredili njegovu koncentraciju. Bradfordov test je prilično osjetljiv, ali na njega mogu utjecati određene tvari u uzorku, poput deterdženata ili soli.
HPLC, ili tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti, također se naširoko koristi za kvantifikaciju peptida. U HPLC-u odvajamo peptid od ostalih komponenti u uzorku na temelju njegovih kemijskih svojstava, poput njegove hidrofobnosti. Otopinu peptida ubrizgavamo u kolonu ispunjenu stacionarnom fazom, a zatim koristimo mobilnu fazu (tekuće otapalo) da gurnemo peptid kroz kolonu. Različiti peptidi će se kretati kroz kolonu različitim brzinama, a mi ih možemo otkriti dok izlaze iz kolone pomoću detektora, obično UV detektora. Uspoređujući područje vrha našeg peptida od interesa s područjem vrha poznatih standarda, možemo izračunati njegovu koncentraciju. HPLC je izvrstan jer može odvojiti i kvantificirati peptide čak iu složenim smjesama, ali oduzima malo više vremena i zahtijeva specijaliziranu opremu.
Sada, razgovarajmo malo o nekim peptidima iz kataloga koje nudimo. uzetiEntero-Hilambatinna primjer. Kada kvantificiramo ovaj peptid, koristimo kombinaciju ovih metoda kako bismo dobili najtočniji rezultat. Prvo koristimo UV-Vis spektroskopiju kako bismo dobili grubu procjenu koncentracije, a zatim je još jednom provjerimo HPLC-om. Na taj način možemo objasniti sve potencijalne kontaminante ili smetnje u uzorku.
Još jedan jeE[c(RGDyK)]2. Ovaj peptid ima neka jedinstvena svojstva i moramo biti posebno oprezni kada ga kvantificiramo. Bradfordov test ovdje možda nije najbolji izbor zbog svog specifičnog sastava aminokiselina, pa se više oslanjamo na HPLC i UV-Vis spektroskopiju.
A onda postojiMazdutid (Lys20(N3-CH2CO-)). Ovo je složeniji peptid, a mi koristimo pristup u više koraka. Počinjemo s UV - Visom kako bismo dobili početno očitanje, a zatim koristimo HPLC kako bismo ga odvojili od nečistoća i dobili točniju kvantifikaciju.
U našoj tvrtki kontrola kvalitete je velika stvar. Pazimo da slijedimo stroge protokole kada kvantificiramo naše peptide iz kataloga. Provodimo više testova na svakoj seriji i uspoređujemo naše rezultate s certificiranim referentnim materijalima kako bismo osigurali točnost. Također vodimo detaljnu evidenciju svih kvantifikacijskih podataka, tako da naši kupci mogu imati puno povjerenje u peptide koje kupuju.
Ako ste na tržištu za visokokvalitetnim kataloškim peptidima i trebate točnu kvantifikaciju, tu smo da vam pomognemo. Bilo da ste istraživač koji traži peptide za svoj sljedeći veliki eksperiment ili farmaceutska tvrtka koja razvija novi lijek, mi imamo peptide koji su vam potrebni. Naš tim stručnjaka uvijek je na raspolaganju za sva pitanja koja imate o našim proizvodima ili postupku kvantifikacije. Dakle, nemojte se ustručavati posegnuti i započeti razgovor o vašim potrebama za peptidima. Spremni smo raditi s vama kako bismo pronašli najbolja rješenja za vaše projekte.
Reference
- Scopes, RK (1994). Pročišćavanje proteina: principi i praksa. Springer.
- Skoog, DA, West, DM, Holler, FJ i Crouch, SR (2013). Osnove analitičke kemije. Cengage učenje.
- Bollag, DM, Rozycki, MD, i Edelstein, SJ (1996). Proteinske metode. wiley - liss.